番茄褪绿病毒外壳蛋白多克隆抗体的制备和应用

doi:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2025.02.031

湖北农业科学 ›› 2025, Vol. 64 ›› Issue (2): 197-201.doi: 10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2025.02.031

番茄褪绿病毒外壳蛋白多克隆抗体的制备和应用

伍维兰¹, 聂三妹¹, 张坤¹, 鲁洲¹, 李战彪², 季英华³, 郭灵芳¹, 章松柏¹

1.长江大学农业农村部长江中游作物绿色高效生产重点实验室（部省共建）,湖北荆州 434025;
2.广西壮族自治区农业科学院农业农村部华南果蔬绿色防控重点实验室,南宁 530007;
3.江苏省农业科学院植物保护研究所,南京 210014

收稿日期:2024-03-21 出版日期:2025-02-25 发布日期:2025-03-07
通讯作者: 郭灵芳（1977-）,女,湖北黄梅人,高级实验师,主要从事化学生物学研究,（电子信箱）glf0498104@163.com;共同章松柏（1978-）,男,湖北黄梅人,教授,主要从事病毒监测与分子病毒学研究,（电子信箱）yangtze2008@126.com。
作者简介:伍维兰（1999-）,女,重庆梁平人,在读硕士研究生,研究方向为病毒监测与分子病毒学,（电话）17302361878（电子信箱）weilan_wu@163.com。
基金资助:
国家自然科学基金面上项目（31972243）; 广西作物病虫害生物学重点实验室基金项目（22-035-31-22KF03）

Preparation and application of polyclonal antibody against tomato chlorosis virus coat protein

WU Wei-lan¹, NIE San-mei¹, ZHANG Kun¹, LU Zhou¹, LI Zhan-biao², JI Ying-hua³, GUO Ling-fang¹, ZHANG Song-bai¹

1. MARA Key Laboratory of Sustainable Crop Production in the Middle Reaches of the Yangtze River （Co-construction by Ministry and Province）, Yangtze University, Jingzhou 434025, Hubei,China;
2. MARA Key Laboratory of Green Prevention and Control on Fruits and Vegetables in South China, Guangxi Academy of Agricultural Sciences, Nanning 530007,China;
3. Institute of Plant Protection, Jiangsu Academy of Agricultural Sciences, Nanjing 210014,China

Received:2024-03-21 Published:2025-02-25 Online:2025-03-07

摘要/Abstract

摘要： 为建立番茄褪绿病毒（Tomato chlorosis virus,ToCV）的快速检测技术,通过RT-PCR技术克隆病毒的主要外壳蛋白（Coat protein,CP）基因,利用Gateway技术将其重组至原核表达载体中,转化至大肠杆菌（Escherichia coli）BL21菌株中诱导表达,将纯化后的CP作为抗原免疫日本大耳兔制备ToCV CP多克隆抗体。间接ELISA显示ToCV CP多克隆抗体的效价为1∶12 800;Western blot和田间试验结果显示多克隆抗体有很好的特异性和灵敏度。ToCV CP多克隆抗体可用于田间ToCV的检测。

关键词: 番茄褪绿病毒（ToCV）, 外壳蛋白（CP）, 原核表达, 多克隆抗体, 制备

Abstract: In order to establish a rapid detection technology for the tomato chlorosis virus （ToCV）, the coat protein （CP） gene of the virus was cloned by RT-PCR technology, and it was recombinant into a prokaryotic expression vector using Gateway technology. It was then transformed into Escherichia coli BL21 strain for induction of expression. The purified CP protein was used as an antigen to prepare a ToCV CP polyclonal antibody by immunizing Japanese rabbits. Indirect ELISA showed that the titer of the ToCV CP polyclonal antibody was 1∶12 800. Western blot and field experiments had shown that the ToCV CP polyclonal antibody had good specificity and sensitivity. The ToCV CP polyclonal antibody could be used for the detection of ToCV in the field.

Key words: tomato chlorosis virus（ToCV）, coat protein（CP）, prokaryotic expression, polyclonal antibody, preparation

中图分类号:

S432.41

伍维兰, 聂三妹, 张坤, 鲁洲, 李战彪, 季英华, 郭灵芳, 章松柏. 番茄褪绿病毒外壳蛋白多克隆抗体的制备和应用[J]. 湖北农业科学, 2025, 64(2): 197-201.

WU Wei-lan, NIE San-mei, ZHANG Kun, LU Zhou, LI Zhan-biao, JI Ying-hua, GUO Ling-fang, ZHANG Song-bai. Preparation and application of polyclonal antibody against tomato chlorosis virus coat protein[J]. HUBEI AGRICULTURAL SCIENCES, 2025, 64(2): 197-201.

参考文献

[1] ORFANIDOU C G, PAPPI P G, EFTHIMIOU K E, et al.Transmission of tomato chlorosis virus (ToCV) by Bemisia tabaci biotype Q and evaluation of four weed species as viral sources[J]. Plant disease, 2016, 100(10): 2043-2049.
[2] XU H N, ZHANG Z H, ZHANG Z, et al.Effects of insulin-like peptide 7 in Bemisia tabaci MED on tomato chlorosis virus transmission[J]. Pest management science, 2023, 79(4): 1508-1517.
[3] 张超越, 韦建明, 李云洲. 番茄褪绿病毒研究进展[J]. 山地农业生物学报, 2023, 42(2): 48-51.
[4] 陈珂,苏洋杨,蔡晓锋,等. 番茄褪绿病毒及植株对其侵染响应性研究进展[J]. 上海师范大学学报(自然科学版),2021,50(2):253-258.
[5] 杨淑珂, 孙红炜, 李凡, 等. 番茄黄化曲叶病毒和番茄褪绿病毒复合侵染的分子鉴定[J]. 安徽农业科学,2022,50(10): 123-128.
[6] ŞAHIN-ÇEVIK M, SIVRI E D, ÇEVIK B. Identification and expression analysis of genes induced in response to tomato chlorosis virus infection in tomato[J]. Plant pathology journal,2019, 35(3): 257-273.
[7] WINTERMANTEL W M, WISLER G C, ANCHIETA A G, et al.The complete nucleotide sequence and genome organization of tomato chlorosis virus[J]. Archives of virology, 2005, 150(11): 2287-2298.
[8] 杨环宇. 番茄褪绿病毒次要外壳蛋白靶标导向的药剂筛选与抗病毒活性研究[D]. 贵阳: 贵州大学, 2020.
[9] AGRANOVSKY A A, FOLIMONOVA S Y, FOLIMONOV A S, et al.The beet yellows closterovirus p65 homologue of HSP70 chaperones has ATPase activity associated with its conserved N-terminal domain but does not interact with unfolded protein chains[J]. Journal of general virology, 1997, 78(3): 535-542.
[10] 王子崇, 杨红丽. 番茄褪绿病毒病的发生与防治[J]. 长江蔬菜, 2015, 389(15): 55-56.
[11] WISLER G C, LI R H, LIU H Y, et al.Tomato chlorosis virus:A new whitefly-transmitted, phloem-limited, bipartite closterovirus of tomato[J]. Phyopathology, 1998, 88(5): 402-409.
[12] MOODLEY V, GUBBA A, MAFONGOYA P L.Prevalence, epidemiology and molecular studies of tomato chlorosis virus (ToCV) in South Africa[J]. PLoS one, 2019, 14(7): e0220298.
[13] AL-SALEH M A, AL-SHAHWAN I M, SHAKEEL M T, et al. First report of tomato chlorosis virus (ToCV) in tomato crops in Saudi Arabia[J]. Plant disease, 2014, 98(11): 1590.
[14] FORTES I M, FERNADEZ-MUNZ R, MORIONES E.Host plant resistance to Bemisia tabaci to control damage caused in tomato plants by the emerging Crinivirus tomato chlorosis virus[J]. Frontiers in plant science, 2020, 11: 585510.
[15] TSAI W S, SHIH S L, GREEN S K, et al.First report of the occurrence of tomato chlorosis virus and tomato infectious chlorosis virus in Taiwan[J]. Plant disease, 2004, 88(3):311.
[16] LINDBO J A.TRBO: High-efficiency tobacco mosaic virus RNA-based overexpression vector[J]. Plant physiology, 2007, 145(4): 1232-1240.
[17] 李雨珈, 李杨秀, 王宇宁, 等. 桑脉带相关病毒N蛋白多克隆抗体的制备[J]. 植物病理学报, 2022, 52(2): 138-144.
[18] 阎世江, 郭建恩. 植物病毒病的防治研究进展[J]. 天津农林科技, 2022(6): 26-28,32.
[19] 肖钦之,邓斌,邹海露,等. 植物病毒病生物防治研究进展[J]. 南方农业, 2021, 15(34): 64-69.
[20] TATINENI S, HEIN G L.Plant viruses of agricultural importance: Current and future perspectives of virus disease management strategies[J]. Phytopathology, 2023, 113(2): 117-141.
[21] 王志荣, 王孝宣, 杜永臣, 等. 番茄褪绿病毒病研究进展[J]. 园艺学报, 2016, 43(9): 1735-1742.
[22] 刘永光, 魏家鹏, 乔宁, 等. 番茄褪绿病毒在山东暴发及其防治措施[J]. 中国蔬菜, 2014(5): 67-69.
[23] ZHAO R N, WANG R, WANG N, et al.First report of tomato chlorosis virus in China[J]. Plant disease, 2013, 97(8): 1123.
[24] 高文征. 番茄褪绿病毒病鉴定方法研究及抗病基因初步定位[D]. 北京: 中国农业科学院, 2021.
[25] 王天旗, 史晓斌, 郑立敏, 等. 番茄褪绿病毒侵染黄瓜的首次报道[J]. 植物保护, 2020, 46(2): 91-95.
[26] TIBERINI A, TOMASSOLI L, BARBA M, et al.Oligonucleotide microarray-based detection and identification of 10 major tomato viruses[J]. Journal of virological methods,2010,168(1-2): 133-140.
[27] 孙晓辉,高利利,刘锦,等. 番茄褪绿病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR方法[J].植物病理学报,2018,48(5):700-706.
[28] 张宇. ToCV检测方法建立、侵染性克隆构建及与植物蛋白互作分析[D]. 长沙: 湖南大学, 2019.
[29] 胡丽松, 邬华松, 郝朝运, 等. 利用Gateway技术改造原核表达载体pGEX-4T-1、pET-28a[J]. 热带作物学报, 2015, 36(8): 1445-1450.
[30] 赵忠豪, 潘慧, 刘勇, 等. RBSDV P8蛋白的多克隆抗体制备及其应用[J]. 杂交水稻, 2020, 35(3): 71-75.
[31] FREULER F, STETTLER T, MEYERHOFER M, et al.Development of a novel Gateway-based vector system for efficient, multiparallel protein expression in Escherichia coli[J]. Protein expression and purification, 2008, 59(2): 232-241.
[32] MAGNANI E, BARTLING L, HAKE S.From Gateway to multisite gateway in one recombination event[J]. BMC molecular biology, 2006, 7: 46.

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[1]	刘霞, 马泽刚, 马林. 玉米须绞股蓝复合提取总黄酮工艺及其降压片的制备[J]. 湖北农业科学, 2024, 63(4): 136-140.
[2]	樊淑淼, 李嘉瑜, 焦佳音, 郑芸霏, 胡继仑, 李连珍, 李娟, 洪利亚. 黄精软糖的制备及其工艺优化[J]. 湖北农业科学, 2024, 63(10): 131-135.
[3]	陈惠欣, 臧远龙, 林淑琪, 吕宪东, 崔红静, 侯磊, 王京龙. 石榴籽油大豆异黄酮软胶囊的制备及质量评价[J]. 湖北农业科学, 2023, 62(9): 108-112.
[4]	陈静, 何翔宇, 陈建胜, 陈静波, 邓毓弸, 张学华. 基于GlobeLand30的智能解译样本动态制备方法[J]. 湖北农业科学, 2023, 62(9): 142-150.
[5]	王聪, 王菡, 张海玲, 肖毅然, 郭禹汐, 刘梦迪, 李浩菘, 吴宗澄, 段芙春, 卢士英. 重组早孕因子的原核表达及多克隆抗体制备[J]. 湖北农业科学, 2023, 62(5): 129-134.
[6]	薛彩红, 滕明, 周金艮. 益脑心片的制备工艺和质量标准[J]. 湖北农业科学, 2023, 62(4): 163-167.
[7]	郑新燕, 赵丹, 王木兰, 陈朝琼. FeCl₃改性沸石制备条件优化及磷吸附机制研究[J]. 湖北农业科学, 2023, 62(12): 63-68.
[8]	杨馨, 邹德颖, 张凯, 常江, 常恒祯, 战俊澎, 郭珣, 刘益辛, 程梦妍, 韩成, 胡盼, 卢士英, 李岩松, 柳增善, 任洪林. 小鼠IL-1β原核表达及其与在布鲁氏杆菌侵染巨噬细胞中差异表达的初步研究[J]. 湖北农业科学, 2022, 61(6): 112-116.
[9]	刘霞, 马泽刚, 马林. 玉米须绞股蓝复合饮料的制备工艺及生物活性研究[J]. 湖北农业科学, 2022, 61(14): 131-135.
[10]	韦玲冬, 周新菊, 邹溪, 潘小珊, 吴书童, 杨婷婷. 不同制备条件对绿茶面条品质的影响研究[J]. 湖北农业科学, 2021, 60(20): 139-144.
[11]	曹旗, 潘悦, 郑宇, 王菡, 任洪林, 胡盼, 李岩松, 周玉, 柳增善, 卢士英. 小鼠CD40胞外段的原核表达及多克隆抗体的制备[J]. 湖北农业科学, 2020, 59(6): 130-134.
[12]	彭春燕, 高育慧, 吴华南, 郑卫国, 刘天翔, 李军娟, 喻东, 郑雯芳. 基于园林废弃物真菌菌剂的制备及应用[J]. 湖北农业科学, 2020, 59(14): 69-75.
[13]	杨涛, 李建国, 魏林根, 彭志平, 陈院华. 重金属镉污染农田土壤修复改良剂的制备及应用[J]. 湖北农业科学, 2020, 59(13): 28-30.