农杆菌介导的稻瘟病菌遗传转化体系的建立及优化

doi:10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2025.03.029

湖北农业科学 ›› 2025, Vol. 64 ›› Issue (3): 182-189.doi: 10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2025.03.029

农杆菌介导的稻瘟病菌遗传转化体系的建立及优化

李爽¹, 张淑梅¹, 田缘^1,2, 潘钰^1,3, 刘伟¹, 闫更轩¹

1.黑龙江省科学院微生物研究所,哈尔滨 150010;
2.东北农业大学食品学院,哈尔滨 150030;
3.黑龙江大学生命科学学院,哈尔滨 150006

收稿日期:2024-05-16 出版日期:2025-03-25 发布日期:2025-04-17
通讯作者: 闫更轩（1996-）,男,黑龙江哈尔滨人,助理研究员,硕士,主要从事植物病害防治研究,（电话）18745058190（电子信箱）predawnyan@126.com。
作者简介:李爽（2000-）,女,内蒙古呼伦贝尔人,硕士,主要从事微生物农药与真菌病害防治研究,（电话）17861408607（电子信箱）ls17861408607@126.com。
基金资助:
省属科研院所科研业务费项目（CZKYF2021-2-C031）

Establishment and optimization of Agrobacterium mediated genetic transformation system for Magnaporthe oryzae

LI Shuang¹, ZHANG Shu-mei¹, TIAN Yuan^1,2, PAN Yu^1,3, LIU Wei¹, YAN Geng-xuan¹

1. Institute of Microbiology,Heilongjiang Academy of Sciences,Harbin 150010, China;
2. College of Food Science,Northeast Agricultural University, Harbin 150030, China;
3. School of Life Sciences, Heilongjiang University,Harbin 150006, China

Received:2024-05-16 Published:2025-03-25 Online:2025-04-17

摘要/Abstract

摘要： 以稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）为试验材料,通过PCR获得GFP基因,构建pBarg-GFP-BAR-Amp重组载体,使用农杆菌转化法获得能够稳定遗传的含GFP基因的稻瘟病菌菌株,采用单因素与响应面法优化转化条件。稻瘟病菌遗传转化体系的最佳转化条件：OD_{600 nm}为 0.38（农杆菌菌液浓度）、共培养温度为28.2 ℃、共培养时间为2.12 d,转化效率为280.00×10^-5。PCR鉴定和荧光显微镜观察发现,转化的稻瘟病菌GFP基因能够正常表达,和野生型稻瘟病菌的致病性无显著差异。

关键词: 稻瘟病菌（Magnaporthe oryzae）, 农杆菌介导, 遗传转化, GFP基因, 建立, 优化

Abstract: ： Magnaporthe oryzae was used as the experimental material. The GFP gene was obtained through PCR, and a pBarg-GFP-BAR-Amp recombinant vector was constructed. The Magnaporthe oryzae strain containing the GFP gene with stable inheritance was obtained using Agrobacterium-mediated transformation. The transformation conditions were optimized using single factor and response surface methodology. The optimal transformation conditions for the Magnaporthe oryzae genetic transformation system were an OD_{600 nm} of 0.38 （Agrobacterium concentration）, a co-culture temperature of 28.2 ℃, a co-culture time of 2.12 days, and a transformation efficiency of 280.00×10^-5. PCR identification and fluorescence microscopy observation revealed that the GFP gene of the transformant Magnaporthe oryzae could be expressed normally, with no significant difference in pathogenicity compared to the wild-type Magnaporthe oryzae.

Key words: Magnaporthe oryzae, Agrobacterium mediated, genetic transformation, GFP gene, establish, optimization

中图分类号:

S432.4

李爽, 张淑梅, 田缘, 潘钰, 刘伟, 闫更轩. 农杆菌介导的稻瘟病菌遗传转化体系的建立及优化[J]. 湖北农业科学, 2025, 64(3): 182-189.

LI Shuang, ZHANG Shu-mei, TIAN Yuan, PAN Yu, LIU Wei, YAN Geng-xuan. Establishment and optimization of Agrobacterium mediated genetic transformation system for Magnaporthe oryzae[J]. HUBEI AGRICULTURAL SCIENCES, 2025, 64(3): 182-189.

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